القائمة الرئيسية

الصفحات

التحاليل الطبية

تحليل CBC Manual - عدّ الدم الكامل يدوياً - طريقة عمل تحليل CBC مانيوال

CBC Manual - طريقة عمل CBC يدوياً

اختبار العدّ الكلي للدم يدوياً CBC Manual

* الهدف من إجراء التحليل


تقدير وحساب بعض مكونات الدم الأساسية مثل ( HB% - RBC - WBC - PLT - HCT - MCV - MCH - MCHC ) وأيضاً الخلايا الشبكية وكل هذه التحاليل موجودة بنسب طبيعية في الجسم وأي اختلاف في هذه النسب يكون له مدلول مرضي.


1- تقدير نسبة الهيموجلوبين في الدم

* تقدير الهيموجلوبين بطريقة جهاز ساهلي ( Sahli's Method )


تعتمد هذه الطريقة علي مقارنة الألوان وفيها يتحول الهيموجلوبين بواسطة حمض الهيدروكلوريك إلي هيماتين حمضي ويتكون هذا الجهاز من ثلاثة أنابيب:

أنبوبتان ملونتان والثالثة ( التي توجد في المنتصف ) تستخدم لإجراء الاختبار ، وهذه مدرجة لكي تعطي قراءة الهيموجلوبين بطريقتين:

إما بالنسبة المئوية % أو بالجرام.


جهاز ساهلي - Sahli's Method


* ملحوظة: هذه الطريقة غير دقيقة ويمكن استخدامها عند إجراء مسح صحي خارج المعمل.

--------------------------------------------------------------------

* تقدير الهيموجلوبين بطريقة الدرابكن ( Drabkin Method )


تقدر كمية الهيموجلوبين بقياس اللون الناتج عند اتحاده بالسيانيد ( محلول جاهز من الشركات المنتجة ) ثم يقاس بجهاز الطيف الضوئي ( Spectrophotometer ) الموجود بجميع معامل التحاليل الطبية.


spectrophotometer - جهاز الطيف الضوئي



ويجب أن يكون لون محلول التخفيف أصفر باهتاً رائقاً يعطي درجة امتصاص صفر عند قراءته علي جهاز القياس الطيفي عند طول موجي 540 نانومتر باستخدام الماء المقطر ( Blank ).

ويحفظ محلول الهيموجلوبين المخفف في زجاجة معتمة ( بنية اللون ) لعدة شهور في درجة حرارة الغرفة.


* كيفية العمل


1- يوضع 5 مل من محلول درابكين + 20 ميكرولتر دم ( Fresh Blood ) باستخدام ماصة أوتوماتيكية.

2- ترج الأنبوبة ثم تترك لمدة 3-5 دقائق حتي يتم التفاعل.

3- يقرأ عند طول موجي 540 نانومتر بعد ضبط صفر الجهاز باستخدام محلول درابكين.

4- تقرأ العينة علي الجهاز ثم تحسب النتيجة بالقانون التالي:


درجة امتصاص الاختبار × 3.6 = تركيز الهيموجلوبين بالجرام / 100 مليلتر × 6.9 = نسبة HB %


* النسب الطبيعية


الرجال -------------------------- ( 18 - 13 )

السيدات ------------------------- ( 16.5 - 11.5 )

سيدات حوامل ------------------- ( 13 - 11 )

أطفال ( حديثي الولادة ) --------- ( 19.5 - 16.5 )

أطفال ( 3 شهور ) -------------- ( 18.5 - 15.5 )

أطفال ( سنة ) ------------------ ( 15.5 - 13.5 )

أطفال ( 3 - 6 سنوات ) --------- ( 14 - 12 )

أطفال ( 10 - 12 سنة ) --------- ( 14.5 - 12 )


--------------------------------------------------------------------


2- العدّ الكلي لكرات الدم الحمراء R.B.Cs Counting



يتم العدّ بواسطة الميكروسكوب وشريحة العدّ Haemocytometer


haemocytometer


* كيفية عدّ كرات الدم الحمراء


1- يخفف الدم بنسبة 1 : 200 في محلول التخفيف ( محلول ملح 9 % ) وذلك بإضافة 20 ميكرولتر دم إلي 4 مل محلول في أنبوبة وزرمان Wasserman ( ويمكن أخذ العينة بواسطة الماصة الجاهزة ذات الانتفاخ والمقسمة ( 0.5 - 1 - 101 ) وذلك بسحب الدم حتي 0.5 ثم التكملة حتي 101 بمحلول التخفيف ).


ماصة تخفيف كرات دم حمراء - انبوبة وزرمان



2- ترج الأنبوبة جيداً لمدة دقيقتين علي الأقل.
3- تملأ شريحة العدّ بماصة شعرية أو ماصة باستير بعد وضع غطاء الشريحة.
4- تعد كريات الدم الحمراء بواسطة العدسة الشيئية 10 أو 40 علي أن يدخل في العدّ الكريات التي تمس القاع والحدود الشمالية للمربعات الصغيرة في 5 مربعات من المربع الأوسط للشريحة ( المربعات الأربعة علي الأطراف + المربع الأوسط ).

كيفية عد كرات الدم الحمراء

الحساب: عدد كريات الدم الحمراء / مم3 = عدد الكريات × 10000


--------------------------------------------------------------------

* أخطاء عملية تؤدي إلي زيادة العدد 


  • حجم الدم أكثر من 20 ميكرولتر أو حجم المحلول أقل من الحجم المطلوب.
  • عدم مزج العينة جيداً مع محلول التخفيف.
  • توزيع كريات الدم الحمراء في شريحة العدّ غير متوازن.
  • ملء خاطئ لشريحة العدّ أو عدّ جميع كرات الدم الحمراء الملامسة للخطوط الجانية.

* أخطاء عملية تؤدي إلي نقص العدد


  • حجم الدم أقل من 20 ميكرولتر أو حجم المحلول أكثر من الحجم المطلوب. 
  • إرجاء العدّ لمدة طويلة.
  • وجود جلطة صغيرة في العينة. 
  • وجود فراغات هوائية أو شوائب.
  • استعمال شريحة غير نظيفة. 

النسب الطبيعية

الرجال:------------------------- ( 4.5 - 6.5 مليون / ملليلتر مكعب )
النساء:------------------------ ( 3.8 - 5.8 مليون / ملليلتر مكعب )
أطفال ( 3 شهور ):-------- ( 3.2 - 4.8 مليون / ملليلتر مكعب )
أطفال ( 3 - 6 أعوام ):----- ( 4.1 - 5.5 مليون / ملليلتر مكعب )
أطفال ( 10 - 12 عام ):----- ( 4 - 5.4 مليون / ملليلتر مكعب )

* أسباب الزيادة المرضية  في عدد كريات الدم الحمراء

  • نقص الأكسجين.
  • أمراض القلب وأمراض تليف الرئتين.
  • وجود بعض أنواع الهيموجلوبين غير الطبيعي.

* أسباب نقص كريات الدم الحمراء

  • أمراض الدم مثل اللوكيميا وفشل نخاع العظام ... إلخ

--------------------------------------------------------------------

3- قياس نسبة الهيماتوكريت Haematocrit ( HCT ) or Packed Cell Volume ( PCV )


- وهو عبارة عن حجم كمية من كريات الدم الحمراء بعد عملية الطرد المركزي لها معبراً عنه بالنسبة المئوية لحجم الدم الكلي، ولا يعتبر الهيماتوكريت مكون من مكونات الدم مثل كريات الدم الحمراء أو الهيموجلوبين.
- للهيماتوكريت علاقة كبيرة بنتائج كرات الدم الحمراء والهيموجلوبين.
- قيمة الهيماتوكريت تستعمل أيضاً في تحديد بعض مؤشرات  كرات الدم الحمراء مثل ( MCV / MCHC ).


انبوبة الهيماتوكريت بعد الفصل



النسب الطبيعية:

الرجال: 42 - 50 %
النساء: 39 - 48 %

القيم المنخفضة:

تشير إلي فقر في الدم وترجع إلي أسباب عديدة منها نزيف - نقص حديد - نقص بحامض الفوليك - نقص بفيتامين B12 - أمراض نخاع العظم وغيرها.

القيم المرتفعة:

تشير إلي حالة طبية تسمي بوليسيثيميا Polycythemia، ويحدث هذا عند المدخنين، مرضي بأمراض رئة أو بمرض نخاع العظم، ويمكن ملاحظة قيم مرتفعة أيضاً في حالة جفاف أو صوم دون شرب سوائل لأنه عندها يرتفع تركيزها بالدم، وهكذا أيضاً عند أشخاص يسكنون بمناطق مرتفعة يكون بها الأكسجين بالهواء أقل. 

--------------------------------------------------------------------

* معاملات كرات الدم الحمراء Blood Indices


أ- متوسط حجم الكرية Mean Corpuscular Volume ( MCV )


MCV = [ Ht / RBC's ] × 10 = ...... Fl ( femto liter )

هذا التحليل يفحص معدل حجم كرة الدم الحمراء.

- نقص متوسط حجم الكرية تعرف بـ Microcyte ونجد هذا النوع من الحجم في:
  • فقر الدم بنقص الحديد Iron Deficiency Anemia
  • أنيميا البحر المتوسط Thalassemia
- زيادة متوسط حجم الكرية تعرف بـ Macrocyte أو Megaloblastic Anemia
ونجد هذا النوع في فقر الدم الناتج عن الأمراض التالية:
  • نقص حامض الفوليك Folate Deficiency 
  • نقص فيتامين B12 Deficiency

القيم الطبيعية
MCV: 80 to 95 femtoliter ( fl )

ب- متوسط حجم هيموجلوبين كرة الدم الحمراء Mean Corpuscular Haemoglobin ( MCH )


MCH = [ Hb ( gm ) / RBC's ] × 10 = ...... Pg ( Pico )

ويعبر هذا التحليل عن معدل وزن ( كمية ) الهيموجلوبين في كرة الدم الحمراء وهو مهم في تشخيص بعض أنواع فقر الدم ونقصان قيمة الـ MCH يعني نقصان كمية الهيموجلوبين في كرات الدم الحمراء.

القيم الطبيعية 
MCH: 27 to 31 pg/cell

ج- متوسط تركيز الهيموجلوبين في كريات الدم الحمراء Mean Corpuscular Haemoglobin Concentration ( MCHC )


%MCHC = [ Hb ( gm ) / Ht ] × 100 = ...... g

وهذا التحليل MCHC يعبر عن معدل نسبة تركيز الهيموجلوبين في كرات الدم الحمراء.
ويساعد هذا التحليل في تشخيص أنواع فقر الدم المختلفة.

نقص تركيز الـ MCHC يعرف بـ Hypochromia
ونجده في فقر الدم الناتج عن نقص في الحديد Iron Deficiency Anemia

القيم الطبيعية
MCHC: 32 to 36 g/dl

د- قياس توزيع كريات الدم الحمراء Red Cell Distribution Width ( RDW ) 


يفحص هذا التحليل مدي اختلاف أحجام كرات الدم المختلفة الواحدة مقابل الأخرى في حالة وجود فقر دم، ويمكن لقيمة الاختلاف أن تشير إلي السبب.

وجود قيم منخفضة يدل علي أن غالبية الكرات متشابهة في أحجامها.
وتدل قيم أعلي من المعدل علي وجود أحجام مختلفة للكريات الحمراء.

القيم الطبيعية
RDW: 11.5 to 14.5% 

--------------------------------------------------------------------

4- العدّ الكلي لكرات الدم البيضاء Total Leucocytic Counting


يتم العدّ بواسطة الميكروسكوب وشريحة العدّ Haemocytometer
محلول التخفيف يحلل كرات الدم الحمراء ويصبغ أنوية كرات الدم البيضاء بلون بنفسجي فيسهل عدّها.

* كيفية عدّ كرات الدم البيضاء 


1- يخفف الدم بنسبة 1 : 20 في محلول التخفيف ( محلول عدّ الدم الأبيض ) وذلك بإضافة 20 ميكرولتر دم إلي 380 ميكرولتر محلول في أنبوبة وزرمان Wasserman Tube ( ويمكن أخذ العينة بواسطة الماصة الجاهزة ذات الانتفاخ والمقسمة ( 0.5 - 1 - 11 ) وذلك بسحب الدم حتي 0.5 ثم التكملة حتي 11 بمحلول التخفيف ).

2- ترج الأنبوبة جيداً.

3- تملأ شريحة العدّ بواسطة ماصة باستير بعد وضع غطاء زجاجي للشريحة.

* طريقة العدّ لكرات الدم البيضاء


تعد كريات الدم البيضاء في المربعات الأربعة الخارجية باستخدام العدسة الشيئية 10 للميكروسكوب.


الحساب: عدد كريات الدم البيضاء / مم3 = عدد الكريات في الأربع جوانب × 50

* الأخطاء العملية التي تؤدي إلي زيادة أو نقص عدد كريات الدم البيضاء


نفس الأسباب التي تم ذكرها عند عدّ كريات الدم الحمراء، لتلافي هذه الأخطاء يمكن عدّ عينة أخري أو عدد أكبر من الكريات البيضاء.

* النسب الطبيعية

  • البالغين: 4000 - 11000 / مم3
  • أطفال ( عام ): 6000 - 18000 / مم3
  • أطفال ( 4 - 7 أعوام ): 5000 - 15000 / مم3
  • أطفال ( 8 - 12 أعوام ): 4500 - 13500 / مم3

* أسباب الزيادة المرضية في عدد كريات الدم البيضاء
 
- زيادة فسيولوجية: أثناء الحمل والولادة، بعد مجهود عضلي وفي الأطفال حديثي الولادة.

- زيادة مرضية: العدوي بالميكروبات العنقودية والسبحية مثل التهاب اللوزتين والزائدة الدودية والتهاب حوض الكلي، أمراض الحساسية والجلدية والطفيليات والعدوي بالفيروسات والأورام الخبيثة وسرطان الدم.

* أسباب مرضية لنقص عدد كريات الدم البيضاء

العدوي ببعض الفيروسات، فشل النخاع العظمي، والتيفود والباراتيفود.

* العدّ النوعي لخلايا الدم البيضاء White Blood Cell Differential Count


الهدف من إجراء الاختبار

هناك أنواع مختلفة من خلايا الدم البيضاء كل منها لها وظيفة مختلفة، وهي باختصار

1- خلايا محببة ( Granulated ) يكون السيتوبلازم فيها محبب وتنقسم إلي ثلاثة أنواع:

  • خلايا متعادلة ( Neutrophils ): المعدل الطبيعي 40 - 75 %
  • خلايا حامضية ( Eosinophils ): المعدل الطبيعي 1 - 6 %
  • خلايا قاعدية ( Basophils ): المعدل الطبيعي 1 %

2- خلايا غير محببة ( Ungranulated )وتنقسم إلي قسمين:

  • خلايا ليمفاوية ( Lymphocytes ) المعدل الطبيعي 20 - 45 %
  • خلايا وحيدة النواة ( Monocytes ) المعدل الطبيعي 2 - 10 %

ويتم العدّ النوعي بعد صبغ الفيلم بصبغة ليشمان ( 10 دقائق صبغة علي فيلم الدم ثم 5 دقائق تجفيف )

--------------------------------------------------------------------

5- الصفائح الدموية Platelets


الصفائح الدموية هي أصغر خلايا الدم ولها دور هام جداً في تجلط الدم والحماية من النزيف ولذلك فإن انخفاض عددها يعرض الشخص للإصابة بالنزيف في أي جزء من الجسم.


القيم الطبيعية: 150 حتي 450 ألف خلية.


صفائح دموية - platelets


* كيفية العدّ للصفائح الدموية


يتم عدّها بواسطة الميكروسكوب وشريحة العدّ Haemocytometer

1- يخفف الدم بنسبة 1 : 20 في محلول التخفيف ( محلول أمونيوم أوكسالات Ammonium Oxalate ) وذلك بإضافة 20 ميكرولتر دم إلي 380 ميكرولتر محلول في أنبوبة وزرمان Wasserman Tube ( ويمكن أخذ العينة بواسطة الماصة الجاهزة ذات الانتفاخ والمقسمة ( 0.5 - 1 - 11 ) وذلك بسحب الدم حتي 0.5 ثم التكملة حتي 11 بمحلول التخفيف ) نفس ماصة عدّ كرات الدم البيضاء.

2- ترج الأنبوبة جيداً وتغلف بقطنة مبللة بالماء وتوضع في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 - 20 دقيقة.

3- تملأ شريحة العد بماصة شعرية أو ماصة باستير بعد وضع غطاء الشريحة.

4- يتم عدّ الصفائح الدموية بواسطة العدسة الشيئية 10 أو 40 علي أن يدخل في العدّ الكرات التي تمس القاع والحدود الشمالية للمربعات الصغيرة في 5 مربعات من المربع الأوسط للشريحة ( المربعات الأربعة علي الأطراف + المربع الأوسط ).


عد الصفائح الدموية




الحساب: عدد الصفائح الدموية / مم3 = عدد الكريات في 5 مربعات × 10000

--------------------------------------------------------------------

* الزيادة في عدد الصفائح الدموية تعرف بـ Thrombocytosis

تحدث هذه الزيادة نتيجة الإصابة ببعض الأمراض مثل:


  • فقر الدم الناتج عن نقص الحديد Iron Deficiency Anemia
  • فقر الدم الانحلالي Haemolytic Anemia
  • مرض الدرن T.B Mycobacterium Tuberculosis
  • مرض زيادة إنتاج كرات الدم الحمراء Polycythemia
  • أحياناً تكون الزيادة فسيولوجية مثل السكن في المرتفعات أو الجهد الكبير.


* الانخفاض في عدد الصفائح الدموية تعرف بـ Thrombocytopenia 

هذا النقص في عدد الصفائح الدموية يسبب القابلية للنزف ويحدث هذا النقص نتيجة لعدد من الأسباب أهمها:


  • أسباب أولية أو ما يسمي ( I.T.P - Idiopathic Thrombocytopenia Pupura ) وهي أسباب غير معروفة.
  • أسباب ثانوية وهذا ناتج عن الإصابة ببعض الأمراض مثل ( العدوي المزمنة - السرطان - تضخم في الطحال - أمراض الكبد - تناول الأدوية التي تثبط نشاط النخاع العظمي ).
  • أسباب أخرى مثل ( الأطفال حديثي الولادة - عدم تناول كميات كافية من العناصر الهامة في تصنيع الدم مثل فيتامين B12 وحامض الفوليك Folic Acid ).


* فحص معدل حجم الصفائح MPV, Mean Platelet Volume

يفحص معدل حجم الصفائح بالدم.


* القيم الطبيعية: 7 إلي 11


القيم العالية لـ MPV يمكن أن تشير إلي تفكك الصفائح الدموية، وتكون صفائح جديدة مكانها أكبر.

ويمكن أيضاً قياس توزيع الصفائح الدموية PWD, Platelet Distribution Width

--------------------------------------------------------------------

6- الكشف عن الخلايا الشبكية Reticulocyte Cells


التعريف 

الخلايا الشبكية هي عبارة عن كريات الدم الحمراء الغير ناضجة، وليس فيها نواة وحجمها أكبر قليلاً من حجم الكريات الناضجة، ويبلغ قطرها بين 7.5 - 8.5 ميكرون وتحتوي علي بقايا الحمض النووي RNA ومن الشبكة الإندوبلازمية الغنية بالريبوسومات وقليل من الميتوكوندريا ويأخذ السيتوبلازم اللون الأحمر أو البني الغامق.


الهدف من إجراء الاختبار

يستخدم هذا الاختبار للكشف عن سلامة النخاع العظمي Bone Marrow وتشخيص الحالات المرضية ( فقر الدم ) والأمراض النزيفية ( الحالات الشديدة )، ويعمل هذا الاختبار لمعرفة مدي فعالية علاج فقر الدم وذلك عن طريق عدّ الخلايا الشبكية ومعرفة نسبتها.


النسب الطبيعية للخلايا الشبكية

  • البالغين: من 0.2 - 2 % من عدد كريات الدم الحمراء
  • حديثي الولادة: تكون نسبتها بين 2 - 6 %


الاختلافات المرضية

* يزداد عدد الخلايا الشبكية في جميع الحالات التي يزداد فيها نشاط النخاع العظمي وتسمي هذه الزيادة Reticulocytosis كما في الحالات التالية:

 

  • فقر الدم المنجلي Sickle Cell Anemia 
  • مرض أنيميا البحر الأبيض المتوسط Thalassemia
  • فقر الدم بعد النزيف الحاد Acute Post-Hemorrhagic Anemia
  • فقر الدم الانحلالي Hemolytic Anemia
  • الأمراض الوراثية الناتج عنها وجود كريات الدم الحمراء المكورة Hereditary Spherocytic Anemia


* ينقص عدد الخلايا الشبكية في جميع الحالات التي يزداد فيها إنتاج كريات الدم الحمراء ويسمي هذا النقص Reticulocytopenia ويحدث هذا في الحالات التالية:


  • فقر الدم الخبيث Pernicious Anemia
  • فقر الدم اللاتنسجي Aplastic Anemia


مدة حياة الخلايا الشبكية

تقدر فترة تكوين الكريات الحمراء داخل نخاع العظم بأسبوع من الزمن بينما فترة حياة الخلايا الشبكية تقدر بيوم أو يومين ولا تلبث بعدها إن تفقد المواد المتبقية والسابقة الذكر وتتحول إلي كرية حمراء ناضجة ولكن بعض هذه الخلايا تخرج إلي الدورة الدموية كما هي.


الأهمية الطبية

تكمن الأهمية الطبية لمعرفة عدد الخلايا الشبكية في ما يلي:


1- تدل علي أحوال النخاع العظمي، فإذا كان إنتاج النخاع العظمي لكريات الدم الحمراء أكثر من الطبيعي فإنه تزداد عدد الخلايا الشبكية في الدورة الدموية الطرفية، أما إذا كان النخاع العظمي لكريات الدم الحمراء أقل من الطبيعي فيقل تبعاً لذلك عدد الخلايا الشبكية في الدورة الدموية الطرفية.


2- تساعد في تشخيص بعض أنواع فقر الدم، فمثلاً ينقص عدد الخلايا الشبكية في فقر الدم اللاتنسجي وترتفع في وجود الأمراض الوراثية التي ينتج عنها وجود كريات مكورة Hereditary Spherocyte 


3- تساعد في متابعة علاج بعض أنواع فقر الدم، فإذا كان العلاج مؤثراً عاد عدد الخلايا الشبكية إلي المعدل الطبيعي، أما إذا كان غير مؤثر بقي عدد الخلايا الشبكية غير طبيعي.

فمثلاً في فقر الدم Megaloplastic Anemia يرتفع عدد الخلايا الشبكية عن المعدل الطبيعي بعد العلاج فإذا بقي العدد كما هو ولم يرتفع فإن العلاج لا تأثير له.


الطريقة العملية للاختبار

  • في أنبوب نخلط كميتان متساويتان ( نقطة + نقطة ) من عينة الدم ومن صبغة New Methylene Blue أو صبغة Brilliant Cresyl Blue
  • نضع الأنبوب بعض الخلط في الحضانة لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
  • نقوم بعمل فيلم علي شريحة زجاجية.
  • بعدما يجف الفيلم نفحصه بالميكروسكوب باستخدام العدسة الزيتية.
  • نقوم بعدّ الكريات الشبكية وكريات الدم الحمراء في 10 Fields .
  • نطبق المعادلة التالية:

الخلايا الشبكية = مجموع عدد الخلايا الشبكية / مجموع كريات الدم الحمراء × 100

النتيجة ( الرقم ...... % )

--------------------------------------------------------------------

أحمد جبر
أحمد جبر
مؤسس موقع ويكيكيميا ، خريج كلية العلوم جامعة دمنهور 2015 ، حاصل علي دبلوم الكيمياء الحيوية التحليلية جامعة المنوفية 2017 ، بحب الفن جداً ، وبكتب شعر أيضاً وألفت العديد من القصائد علي اليوتيوب والفيس بوك مثل كدبة أبريل ، شبه الإنسان ، مسمار وصامولة ، سيلز ريفيو ، حادي وبادي ، قاضي الغرام ، ما تهتمش ، لسه فاكرها ، بالمللي ، وغيرها الكثير .. My Concept: make the CHANGE you want to

تعليقات